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    通過實驗室離心機深入了解細胞

    發布時間:2022-8-26 14:48:58??????點擊:

      通過實驗室離心機采用差速離心法實現細胞內各種成分的分離,從而了解細胞核以及線粒體并進行鑒定。

      分離純化的方法:

      根據細胞器的大小、形狀、密度等物理特性差異,離心成為亞細胞組分分離過程中最廣泛應用的技術。

      離心是利用旋轉運動的離心力以及物質的沉降系數或浮力密度的差異進行分離、濃縮和提純的一種方法。

      主要包括差速離心、密度梯度離心等方法。

      密度梯度離心:

      ·當顆粒之間存在沉降系數差時,在一定離心力作用下,

      顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區域上形成區帶的方法。

      ·兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度,離心時,線粒體和比它沉降系數小的細胞組分聚集到梯度交界處,而沉降系數較大的細胞組分沉到離心管底部。

      詳細實驗步驟:

      動物肝細胞勻漿制備:

      (1)取出肝臟(2g左右),先用清水沖洗干凈后,放在置于冰塊上的培養皿中用剪刀剪成小塊,去除結締組織,用生理鹽水反復洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。

      (2)加入10mL預冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液(⑶將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機中進行搗碎,直至沒有可見的組織塊為止。

      (4)將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中,實驗室離心機1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)。

      用差速離心法分離細胞勻漿中的各種細胞組分:

      常用介質:

      常用介質(高溶解性的惰性物質):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。

      整個實驗過程中除了按規定操作外,要格外注意離心機的使用安全,另外盡可能先充分剪碎肝組織,縮短勻漿時間,整個分離過程不宜過長,以保持組分生理活性。


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